②流式细胞仪系统

流式细胞仪是在激光技术、荧光标记技术、单克隆抗体技术、光电技术以及计算机技术等交叉融合的基础上发展起来的一种先进的生物医学测量仪器。 流式细胞仪一般配备三种激光，分别是488nm蓝激光、638nm红激光和405nm紫激光，共能检测13 色荧光。目前在国内临床市场上，主流配置以两激光检测 6色（2L6C）和两激光检测8色（2L8C）的仪器为主 目前 临床型流式细胞仪 最高 可配置三激光检测13色（3L13C）。

常见的临床型流式细胞仪

流式细胞仪的特点

①单细胞分析：流式细胞分析的对象是单个细胞或其他生物颗粒，临床检验中常见的外周血样本 经制备 染色后可直接上机检测；

②多参数分析：流式细胞分析 仪 可以获得细胞或其他生物颗粒的大小和形态复杂程度等物理参数，亦可以通过荧光染料标记技术对细胞的核酸含量、抗原表达、酶活性以及细胞膜流动性等进行检测；

③高通量检测：流式细胞仪每秒钟可以对上万的细胞进行分析，最终样本中被检测的细胞数量可达数百万个，因此流式细胞术对细胞特性的分析和计数更加准确；

④定性、定量分析：流式细胞分析可以荧光强度判断靶抗原是否表达或表达量的高低。

流式细胞仪的工作原理

待测样本经制备而成单 细胞悬液，在流式细胞仪精细的液流和压力控制下，受到鞘液的包裹和约束，细胞排成单列 高速由流动室（ Flow Cell ）喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过光学检测区，液柱中的细胞在入射的激光束照射下产生前向散射光（Forward Scatter FSC ）和侧向散射光 Side Scatter SSC ），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。

流式细胞仪工作原理 结构 图

（图片来源于网络）

流式细胞仪的主要结构

①流动室和液流系统：

流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成 。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上 ，以确保单个细胞或颗粒通过照射区。 流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。

②激光源和光学系统：

当液柱通过光学检测区，液柱中的细胞在入射的激光束照射下产生前向散射光（ Forward Scatter FSC ）和侧向散射光（ Side ScatterSSC ），它们分别反映细胞大小和颗粒度 。 而 经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。

③光电管和检测系统：

经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光会通过光电转换器 转变成电信号，经过放大器放大后输入分析仪器进行测量。

④计算机和分析系统：

经放大后的电信号被送往计算机分析器。多道的道数是 和电信号的脉冲高度相对应的，也是和光信号的强弱相关的。通过相适应的软件即可对数据进行加工分析，实现 分析结果的输出。

荧光信号检测示意图